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基因工程(genetic engineering)又称基因拼接技术和DNA重组技术 ,是以分子遗传学为理论基础,以分子生物学和微生物学的现代方法为手段,将不同来源的基因按预先设计的蓝图 ,在体外构建杂种DNA分子,然后导入活细胞,以改变生物原有的遗传特性、获得新品种 、生产新产品 。基因工程技术为基因的结构和功能的研究提供了有力的手段。
基因操作的基本步骤
进行基因操作一般要经历四个基本步骤,也就是基因操作的“四步曲”。
提取目的基因
基因操作的第一步 ,是取得人们所需要的特定基因,也就是目的基因(如图) 。如前
面提到的苏云金芽孢杆菌中的抗虫基因,还有植物的抗病(抗病毒、抗细菌)基因、
种子的贮藏蛋白的基因 ,以及人的胰岛素基因、干扰素基因等,都是目的基因。
要从浩瀚的“基因海洋 ”中获得特定的目的基因,犹如大海捞针 ,是十分不易的。科学家们经过不懈地探索,想出了许多办法,概括地说 ,主要有两条途径:一条是从供体细胞的dna中直接分离基因;另一条是人工合成基因。
直接分离基因最常用的方法是“鸟枪法”,又叫“散弹射击法” 。这种方法犹如用猎枪发射的散弹打鸟,无论哪一颗弹粒击中目标 ,都能把鸟打下来。鸟枪法的具体做法是:用限制酶将供体细胞中的dna切成许多片段,将这些片段分别载入运载体,然后通过运载体分别转入不同的受体细胞,让供体细胞所提供的dna(外源dna)的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制(在遗传学中叫做扩增) ,从中找出含有目的基因的细胞,再用一定的方法把带有目的基因的dna片段分离出来。如许多抗虫 、抗病毒的基因都可以用上述方法获得 。
用“鸟枪法 ”获取目的基因的缺点是工作量大,具有一定的盲目胜。又由于真核细胞的基因含有不表达的dna片段 ,不能直接用于基因的扩增和表达,因此,在获取真核细胞中的目的基因时 ,一般是用人工合成基因的方法。
目前人工合成基因的方法主要有两条途径 。一条途径是以目的基因转录成的信使rna为模板,反转录成互补的单链dna,然后在酶的作用下合成双链dna ,从而获得所需要的基因。另一条途径是根据已知的蛋白质的氨基酸序列,推测出相应的信使rna序列,然后按照碱基互补配对原则 ,推测出它的结构基因的核苷酸序列,再通过化学的方法,以单核苷酸为原料合成目的基因(如图)。如人的血红蛋白基因、胰岛素基因等就可以通过人工合成基因的方法获得 。
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