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问题一：怎么看肝功能化验单 主要指标编辑

一、

肝功能化验单[1]

谷丙转氨酶（ALT）：0～40μ/L

二
、谷草转氨酶（AST）：0～40μ/L

三、碱性磷酸酶（ALP）：30-90u/L

四 、谷氨酰转移酶（GGT）：小于40单位

五
、总蛋白（TP）：60-80克/L；白蛋白（A）：40-55克/L；球蛋白（G）：20-30克/L；白蛋白（A）/球蛋白（G）：1.5-2.5：1

六、总胆红素：1.71－17.1μmol/L(1－10mg/L)；间接胆红素1.7-13.7μmol/L；直接胆红素：1.71－7μmol/L(1－4mg/L)

七 、甲胎蛋白(AFP)：

主要在胎儿肝中合成，分子量6.9万
，在胎儿13周AFP占血浆蛋白总量的1/3。在妊娠30周达最高峰，以后逐渐下降 ，出生时血浆中浓度为高峰期的1%左右
，约40mg/L，在周岁时接近成人水平（低于30μmg/L）[2] 。

2化验说明编辑

肝功能检查是通过各种生化实验方法监测与肝脏功能代谢有关的各项指标 ，以反映肝脏的功能基本状况
。不肝功能化验单是对肝功能化验结果的显示
，医生通过对肝功能化验单的查看，可以很好的判断出一个人肝脏的情况 ，如果出现病变的话
，医生可以根据患者的检查结果得出相应的结论。以此作为参考的依据 。对于不同的医院来说，其肝功能化验单的所显示的结果的参考值可能会存在这差别 ，这是由不同的医院自行决定的
。

在肝功能的化验单中显示了包括对转氨酶
，像谷丙转氨酶
、谷草转氨酶，白蛋白 ，球蛋白，白球比值
，胆红素，胆汁酸等多项检查结果的显示。每一项检查结果显示的内容所代表的意思不尽相同 ，通过对肝功能化验单所显示的分析
，再和参考值结果对比分析，可以判断出一个人的肝脏是否出现了问题 ，或者是问题的严重程度
，不过很多人看不懂肝功能化验单，因此说学会看肝功能化验单[3]很重要 。

3基本项目编辑

(1)反映肝实质损害的指标

主要包括丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)等 ，其中ALT是最常用的敏感指标
，1%的肝细胞发生坏死时，血清ALT水平即可升高1倍
。AST持续升高 ，数值超过ALT往往提示肝实质损害严重
，是慢性化程度加重的标志。

(2)反映胆红素代谢及胆汁淤积的指标

主要包括总胆红素(TBil) 、直间接胆红素
、尿胆红素、尿胆原 、血胆汁酸(TBA)
、γ―谷氨酰转肽酶(γ―GT)及碱性磷酸酶(ALP)等 。肝细胞变性坏死，胆红素代谢障碍或者肝内胆汁淤积时 ，可以出现上述指标升高
。溶血性黄疸时，可以出现间接胆红素升高。

(3)反映肝脏合成功能的指标

主要包括白蛋白、前白蛋白 、胆碱脂酶及凝血酶原时间和活动度等
，长期白蛋白、胆碱脂酶降低，凝血酶原活动度下降 ，补充维生素K不能纠正时
，说明正常肝细胞逐渐减少，肝细胞合成蛋白
、凝血因子功能差 ，肝脏储备功能减退
，预后不良 。

(4)反映肝纤维化的指标

主要包括Ⅲ型前胶原(PⅢP)、Ⅳ型胶原(C―Ⅳ) 、透明质酸(HA)
、层连蛋白(LN)等，这些指标可以协助诊断肝纤维化和早期肝硬化。

(5)肝脏凝血功能的检测指标

肝脏能合成Ⅲ及因子a链以外的全部凝血因子 ，在维持正常凝血机能中起重要作用
。肝病患者的凝血因子合成均减少
，临床可出现牙龈、鼻黏膜出血，皮肤淤斑 ，严重者可出现消化道出血。一般
，最早出现 、减少最多的因子Ⅶ，其次是因子Ⅱ和Ⅹ ，最后出现，减少最少的是因子Ⅴ 。

A
、凝血酶原时间（PT）

正常值为11～15秒
，较正常对照延长3秒以上有意义
。急性肝炎及轻型慢......>>

问题二：肝功能化验单如何看 很多人拿到肝功能化验单之后并不知道那些指标都代表这什么，今天民众体检中心的专家就来给大家讲解一下 ，以及肝功能化验单上的一些指标的含义。由于每家医院的实验室条件、操作人员 、检测方法的不同
，因此不同医院提供的肝功能检验正常值参考范围一般也不相同 。在这里我们不再罗列每个项目的正常值参考范围，只就每个项目的中文名称
、英文代码及有何主要临床意义作一介绍
。：在肝功能化验单上反映肝细胞损伤的项目以血清酶检测常用 ，包括丙氨酸氨基转移酶(俗称谷丙转氨酶AL T)、门冬氨酸氨基转移酶(俗称谷草转氨酶AST ) 、碱性磷酸酶(AL P)
、γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT或GGT )等。在各种酶试验中
，ALT 和AST 能敏感地反映肝细胞损伤与否及损伤程度 。各种急性病毒性肝炎、药物或酒精引起急性肝细胞损伤时，血清ALT 最敏感 ，在临床症状如黄疸出现之前ALT 就急剧升高
，同时AST 也升高，但是AST 升高程度不如ALT.而在慢性肝炎和肝硬化时 ，AST 升高程度超过ALT 
，因此AST 主要反映的是肝脏损伤程度
。在重症肝炎时，由于大量肝细胞坏死 ，肝功能化验会出现，血中ALT 逐渐下降
，而此时胆红素却进行性升高，即出现“胆酶分离”现象 ，这常常是肝坏死的前兆。在急性肝炎恢复期
，如果出现ALT 正常而γ-GT持续升高，常常提示肝炎慢性化 。患慢性肝炎时如果肝功能化验单上γ-GT持续超过正常参考值 ，提示慢性肝炎处于活动期
。在肝功能化验单上
，反映肝脏分泌和排泄功能的项目包括总胆红素(TBil) 、直接胆红素(DBil)、总胆汁酸(TBA )等的测定。当患有病毒性肝炎
、药物或酒精引起的中毒性肝炎、溶血性黄疸 、恶性贫血
、阵发性血红蛋白尿症及新生儿黄疸、内出血等时，都可以出现总胆红素升高 。直接胆红素是指经过肝脏处理后 ，总胆红素中与葡萄糖醛酸基结合的部分。直接胆红素升高说明肝细胞处理胆红素后的排出发生障碍
，即发生胆道梗阻
。如果同时测定TBil和DBil，可以鉴别诊断溶血性 、肝细胞性和梗阻性黄疸。溶血性黄疸：一般TB il 35%;阻塞性黄疸：一般TBil>340 μmol /L  ，直接胆红素/总胆红素>60% 。另外γ-GT
、ALP 、5 '-核苷酸(5 '-NT)也是很敏感的反映胆汁淤积的酶类
，它们的升高主要提示可能出现了胆道阻塞方面的疾病
。在肝功能化验单上，反映肝脏合成贮备功能的项目包括前白蛋白(PA) 、白蛋白(Alb )
、胆碱酯酶(CHE )和凝血酶原时间(PT)等。它们是通过检测肝脏合成功能来反映其贮备能力的常规试验 。前白蛋白、白蛋白下降提示肝脏合成蛋白质的能力减弱
。当患各种肝病时 ，病情越重，血清胆碱酯酶活性越低。如果胆碱酯酶活性持续降低且无回升迹象
，多提示预后不良 。肝胆疾病时ALT 和GGT 均升高，如果同时CHE 降低者为肝脏疾患 ，而正常者多为胆道疾病
。另外CHE 增高可见于甲亢 、糖尿病
、肾病综合征及脂肪肝。凝血酶原时间(PT)延长揭示肝脏合成各种凝血因子的能力降低 。在肝功能化验单上
，反映肝脏纤维化和肝硬化的项目包括白蛋白(Alb )、总胆红素(TBil) 、单胺氧化酶(MAO )、血清蛋白电泳等
。当病人患有肝脏纤维化或肝硬化时，会出现血清白蛋白和总胆红素降低 ，同时伴有单胺氧化酶升高。血清蛋白电泳中γ球蛋白增高的程度可评价慢性肝病的演变和预后
，提示枯否氏细胞功能减退......>>

问题三：如何看懂肝功能化验单呢? 临床上肝功能检查的主要项目包括:蛋白代谢检查.糖代谢检查.脂类检查.胆红素代谢检查.血清酶学检查等.常见以下几种酶:谷丙转氨酶(英文简写为ALT或GPT).谷草转氨酶(AST或GOT).碱性磷酸酶(英文简写为ALP).γ-氨酰转肽酶(英文简写为γ-GT).胆碱酯酶(英文简写为CHE).它们的正常值一般在化验单上标示出来.如果采取的化验方法不同.各种酶的值也就不同.通常的参考值是:ALT>

问题四：肝功能报告表怎么看 鉴于大家都不看不明白肝功能化验单，因此我们做了下面的肝功能化验单对照表 ，里面包含了肝功能检查项目
、肝功能指标的正常值、肝功能指标的意义等 。

项目 缩写 正常值 肝功能检查项目的意义(偏高的意义)

谷丙转氨酶 ALT 0~40 谷丙转氨酶偏高可能是肝脏受到损害造成的
，如患慢性肝炎 、肝硬化肝癌等。

谷草转氨酶 AST 0~40 肝功能检查中谷草转氨酶升高意味着肝脏损害严重
。

谷草/谷丙 AST/ALT 0.80~1.5 谷草/谷丙比值偏高说明肝存在实质的损害

谷氨酰转移酶 GGP 7~32 当肝内合成亢进或胆汁排出受阻时，血清中GGT增高。

碱性磷酸酶 ALP 53~128 常见于骨病
、肝病

总胆红素 TBILI 5.1~19.0 肝脏发生炎症、坏死 、中毒等损害时均可以引起胆红素偏高

直接胆红素 DBILI 0.0~5.1 肝内及肝外阻塞性黄疸 ，胰头癌
，毛细胆管型肝炎及其他胆汁瘀滞综合征等 。

间接胆红素 IBILI 5.0~12.0 衰老红细胞被破坏后产生出来的血红蛋白衍化而成

总蛋白 TP 60~80 主要是血清中水分减少，使总蛋白浓度相对增高 ，如呕吐
、大量出汗

白蛋白 ALB 35~55 主要由于血液浓缩而致相对性增高，如严重脱水和休克
。

球蛋白

GLB 15.0~35.0 球蛋白是机体免疫器官制造的, 当体内存在病毒等抗原（敌人）时,球蛋白就会升高。

白球比 ALB/GLB 1.00~2.00 白球比值偏低、倒置
，可能有慢性肝实质性损害，预后较差

总胆固醇 CHOL 3.35~6.45 见于高脂血症 、动脉粥样硬化
、糖尿病、肾病综合征 、胆总管阻塞
、高血压等 。

甘油三酯 TRIG 0.48~1.17 甲状腺功能亢进 ，肾上腺皮质机能减退
，肝功能严重低下
。

尿酸 UA 202~416 常见于痛风、白血病 、恶心肿瘤等。

问题五：肝功能化验单怎么看 很多人都不知道，实际上解读一张肝功能化验单并没有想象中的那样困难 。下面就请肝病专家教大家 ，让大家更加深刻的理解肝功能化验单上各个指标都有什么含义
。肝功能生化学指标中的转氨酶、胆红素
、球蛋白的水平在检查时如果数值越高
，说明肝脏的病情越重，而有肝脏合成的白蛋白指标检查结果越低 ，说明肝脏受损程度越深。患者只要结合个人实际的检查数值和医院的正常值对比就可获知自己的每个指标是高还是低 。推荐阅读》》》肝功能检查注意事项 肝功能五项指标一般的
，在肝功能生化学指标检查后，如果确定了肝功能异常 ，还要进行乙肝五项病毒指标的检查
，通过hbsag（表面抗原）、hbsab（表面抗体） 、h罚eag（e抗原）
、hbeab（e抗体）、hbcab（核心抗体）的检查，了解是否是因为感染了乙肝病毒导致 ，同过这五项的检查再结合hbvdna的定量分析，就可以了解病毒数量
，结合转氨酶的变化，就可以确定最佳的治疗时机
。当然除了自己要了解以外 ，找一家正规专科医院治疗是非常关键的。在这里为大家推荐国内最好的肝病医院--北京肝病医院
，该院拥有国内先进的肝病诊疗设备，其中高速螺旋CT 、核磁共振
、乙肝病毒HBV基因检测系统、肝脏B超等一批高精端医疗设备达国内一流水平 ，这为精确诊断提供了最科学的依据 。

问题六：如何看肝功化验单 很多朋友不知道肝功能化验单怎么看,所以有很多贻误病情的例子.所以,我们要学会自己分析肝功能化验单,检查自己是否感染病毒.

肝功能化验单之胆红素定量试验：

用这种试验了解病人有无黄疸及黄疸的深浅情况.胆红素的正常值是100毫升的血清含量不超过1毫克.含量超过1毫克的为异常,表明有黄疸；胆红素含量越高,表明黄疸程度越深.

肝功能化验单之麝香草酚浊度试验（也称T.T.T）：

用这种试验了解肝细胞损害的程度,正常数值为0－6单位；如果超出6单位为不正常.还有一种类似的试验方法是硫酸锌浊度试验,正常值为12单位以下.

肝功能化验单之丙氨酸转氨酶活性试验（ALT)

旧称谷一丙转氨酶活性试验（也称GPT）；肝细胞里含有很多丙氨酸转氨酶,当肝细胞受到损害时,这种酶就会从肝细胞里释放出来,进入血液里,使血液里的丙氨酸转氨酶浓度增高.ALT正常范围是赖氏比色法：

问题七：如何看肝功能化验单 10分 您好！

1 、你是乙肝大三阳
，谷丙转氨酶42稍高2个，你的HBV―DNA 4.03乘以十的供次方 ，病毒量403000000
，病毒处于复制中，最好进行抗病毒治疗 ，服用贺普丁
，1片/次/日，至少连服1年 ，三个月或者半年检测一次B超
、肝功和HBV-DNA，如果病毒停止复制
，转氨酶自然复原；

2、如乙肝病毒不再复制，贺普丁减量服用 ，但不可马上停药
，防止乙肝病毒反弹，直至贺普丁减量至最小量方可停服 ，如果肝功检验正常
，HBV-DNA检验呈阴性，且有抗病毒治疗一年以上 ，可以循序渐进地停止抗病毒治疗
，与乙肝病毒和平共处；

3 、饮食上多食用菌类食品，如木耳
、香菇、蘑菇等 ，能提高免疫力
，鱼类含有丰富的蛋白质且易消化，多吃新鲜蔬菜和水果 ，增加VC含量，不吸烟 、不饮酒
，减少肝脏负担，少食用和不食用油炸、腌制
、油腻太大、辛辣带有 *** 性的食品 ，以清淡饮食为宜。

问题八：肝功能化验单和乙肝化验单怎么看？ 诊断：病毒性肝炎（乙型）
，提示“大三阳 ”，具有较强传染性
。

但目前肝功能（ALT 、AST）未见明显异常 ，未进入失代偿期
，比较理想。

积极治疗乙型肝炎病毒，同时加强护肝 ，定期复查肝功能 。

PCR

一
、PCR概述

1、什么是PCR

聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction
，简称PCR）又称无细胞分子克隆或特异性DNA序列体外引物定向酶促扩增技术
。 由美国科学家PE（Perkin Elmer珀金-埃尔默）公司遗传部的Dr. Mullis发明，由于PCR技术在理论和应用上的跨时代意义 ，因此Mullis获得了1993年化学诺贝尔奖。

2 、PCR技术发展史

PCR原理是由一对引物介导
，能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增，经过n个热循环扩增 ，扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0＜E＜1,扩增效率＝倍，使得检测扩增产物中的特定基因成为可能 。

聚合酶链式反应自从1993年到现在很快经历了四代产品：

第一代：手动/机械手式水浴基因扩增

如上图所示
，用三个恒温水浴箱，分别将三个水浴温度恒定在三个温度：PCR的高温变性温度（如94℃）低温复性温度（如58℃） ，适温延伸温度（如72℃）
。再用一个装有PCR标本试管的提篮
，用手工在不同温度的水浴箱中依次水浴，标本在每个水浴箱中恒温的时间用秒表计时。这样PCR标本就能完成下述形式的热循环：

94℃ 30S 58℃ 45S 72℃ 60S

40次循环

这种方法的特点是：实验人员劳动强度大 ，容易因疲劳引起差错；而优点是:设备简单
，投资少，与自动化基因扩增仪相比 ，它无须升降温过程
，实验时间短，试验更接近理想PCR反应条件 ，事实表明实验效果还是不错的
，但由于标本试管从一个水浴箱往另一个水浴箱移动中要较短暂暴露于空气中，因此如移动速度不够快时也会对标本形成温度干扰 ，影响结果 。本方法的另外一些缺点包括只能局限三个温阶（某些PCR反应需要多于三个温阶）
、液体污染以及在低气压地区水温难以烧到94℃变性温度等
。

为改进提高本方法的自动化水平，有人设计了机械手装置
，替代上述手工移动标本过程，形成了机械手水浴式基因扩增仪 ，该改进解决了实验人员的高强度劳动问题
，但又带来了一个机械手部件大行程频繁相对运动而引起的高故障。这种类型的基因扩增仪在九十年代中期我国北京、上海有定型的产品销售，应用也较广 ，曾为我国的分子生物学的发展做出过积极贡献
，而后便逐步被自动化程度更高的扩增仪替代，现在很少有单位使用 。

第二代：自动化控制型定性基因扩增仪

与上述水浴式扩增仪相比 ，也有人称该种扩增仪为干式基因扩增仪
，它是最具代表性的扩增仪，包括后续介绍的第三代 、第四代都是以第二代为基础集成了定量检测部分
。

第三代：终点定量/半定量

第二代的定性PCR只能判断阴性阳性 ，而无法评价特定核酸的浓度及定量分析
，定量PCR至少能达到定性PCR无法实现的下列功能：

?潜伏期病毒浓度探测

?感染程度

?致病病原体数量变化测定

?抗病毒药物疗效评估

?恢复期病毒载量检测

自从1996年美国ABI公司发明第一台荧光定量PCR仪以来，PCR技术和应用从定性向定量快速发展.终点定量PCR的优点是设备投资少 ，对于国内经济条件还不能购买昂贵实时荧光定量PCR仪的科研单位和医疗机构，利用现有的第二代常规定性PCR仪
，在添加一台专用的单孔PCR终点产物荧光定量检测仪便可开始工作，起到定量的作用。终点定量PCR技术是从定性向实时定量过渡的一个中间产品 ，而PCR终点产物荧光定量仪进口产品较少
，国产仪器较多，如西安天隆的TL988 ，上海棱光的DA620型等

第四代：实时定量PCR

实时定量QPCR仪＋实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件
，构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统 。

见下图：(略)

2
、实时荧光定量PCR的优势：

设备由荧光定量系统和计算机组成，用来监测循环过程的荧光。与实时设备相连的计算机收集荧光数据
。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图表 。原始数据收集后可以开始分析
。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异。正常化后可以设定域值水平 ，这就是分析荧光数据的水平 。样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值（限制点的循环数）
。域值应设定在使指数期的扩增效率为最大
，这样可以获得最准确，可重复性的数据。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品 ，线性回归分析将产生一条标准曲线
，可以用来计算未知样品的浓度 。

3、实时荧光定量PCR技术原理

所谓real-time Q-PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基因 ，利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法
。在 real-time 技术的发展过程中
，两个重要的发现起着关键的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的发现 ，它能降解特异性荧光记探针
，因此使得间接的检测PCR产物成为可能。（2）此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过程 。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用
。

PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的，随着反应循环数的增加 ，最终PCR反应不再以指数方式生成模板
，从而进入平台期。在传统的PCR 中，常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反应的最终扩增产物 ，因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处 。在real-time Q-PCR中
，对整个PCR反应扩增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号，随着反应时间的进行 ，监测到的荧光信号的变化可以绘制成一条曲 线。在PCR反应早期
，产生荧光的水平不能与背景明显地区别，而后荧光的产生进入指数期 、线性期和最终的平台期 ，因此可以在PCR反应处于指数期的某一点 上来检测PCR产物的量，并且由此来推断模板最初的含量
。为了便于对所检测样本进行比较
，在real-time Q-PCR反应的指数期，首先需设定一定荧光信号的域值 ，一般这个域值（threshold）是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline）
，荧光域值的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号，它可用于定义 样本的域值循环数（Ct） 。Ct值的含义是：每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数
。研究表明 ，每个模板的Ct值与该模板的起始拷贝数的 对数存在线性关系
，起始拷贝数越多，Ct值越小。利用已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线 ，因此只要获得未知样品的Ct值
，即可从标准曲线上计算出该样 品的起始拷贝数 。

4
、实时荧光定量PCR技术在医疗方面的应用

⑴ 病原体检测：目前，采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体 、解脲支原体、人类乳头瘤病毒
、单纯疱疹病毒、人类免疫缺陷病毒 、肝炎病毒
、流感病毒、结核分枝杆菌 、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定
。与传统的检测方法相比具有灵敏度高
、取样少、快速简便等优点。

如：结核菌基因诊断的意义主要表现在：

a.区分TB与其它分枝杆菌；

b.检测TB耐药基因；

c.提高TB的阳性检出率 。

⑵ 产前诊断：到目前为止 ，人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗
，只能通过产前监测，减少病婴出生 ，以防止各类遗传性疾病的发生，如为减少X连锁遗传病患儿的出生
，从孕妇的外周血中分离胎儿DNA，用实时荧光定量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法 ，易为孕妇所接受
。

⑶ 药物疗效考核：对乙型肝炎病毒 (HBV) 、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析显示：病毒量与某些药物的疗效关系。HCV高水平表达
，干扰素治疗作用不敏感，而HCV低滴度 ，干扰素作用敏感；在拉米夫定治疗过程中
，HBV-DNA的血清含量曾有下降，随后若再度上升或超出以前水平 ，则提示病毒发生变异 。如PCR技术在HBV检测中的应用及意义：

a.了解乙肝病毒在体内存在的数量
。

b.是否复制。

c.是否传染
，传染性有多强 。

d.是否有必要服药。

e.肝功能异常改变是否由病毒引起
。

f.判断病人是适合用哪类抗病毒药物。

g.判断药物治疗的疗效 。

⑷ 肿瘤基因检测：尽管肿瘤发病的机理尚未清楚，但相关基因发生突变是致癌性转变的根本原因已被广泛接受
。癌基因的表达增加和突变 ，在许多肿瘤早期就可以出现。实时荧光定量PCR不但能有效地检测到基因的突变
，而且可以准确检测癌基因的表达量 。目前用此方法进行过端粒酶hTERT基因
、慢性粒细胞性白血病WT1基因、肿瘤ER基因 、前列腺癌PSM基因
、肿瘤相关的病毒基因等多种基因的表达检测
。随着与肿瘤相关的新基因的不断发现，荧光定量PCR技术将会在肿瘤的研究中发挥更大的作用。

(5)在优生优育中的应用:

近年来经济发展迅猛 ，人民生活水平逐年提高，对自身及家人特别是下一代的身体健康愈来愈重视 。另外
，由于国内计划生育工作逐步走向深化，独生子女比较多 ，孩子的身体素质更成为长辈们关注的焦点
。因此
，怎样提高新生儿质量改善人类遗传素质，即优生优育已显得非常重要。①避免有严重遗传性疾病和先天性疾病的个体出生 。②增进体力、智力优秀个体的繁衍
。其中避免有严重遗传性疾病及先天性疾病个体出生是优生优育最基本的内容。从临床优生学角度分析具体工作包括在母亲妊娠期间对母亲及胎儿进行遗传学检查尽量排除常见的遗传性疾病个体的出生 ，另外在妊娠期检查母亲是否患有某些易引起胎儿畸形的传染性疾病如弓型虫 、风疹病毒、衣原体等感染 。以往对遗传性疾病的检测主要使用染色体分析法
，而临床绝大部分遗传性疾病是基因病而不是染色体病，染色体发析法不能检出的。若使用PCR基因扩增法联合单链构型多态性分析（sscp）
、限制性片段长度多态性分析（RFCP）等位基因特异性寡核某酸（Aso）点杂交或差异PCR可以很方便地检出单个基因的突变而且其准确性可达95%以上 ，因此使这一问题得到了较好的解决
。常见的易致胎儿畸形的感染性疾病原体主要有单疱病毒（HSVⅡ）、风疹病毒（RV） 、人巨细胞病毒（HCMV）
、弓形体（TOX）及沙眼衣原体（CT）。以往这些病原体感染诊断比较困难
，主要靠培养法进行确诊，而培养法费时 ，代价昂贵
，而且受到采样、样本保存及用药等因素的影响，基本不能在临床中推广 。PCR基因扩增法因其高敏感性 、高特异性非常适合这些疾病诊断及疗效跟踪 ，是最值得推荐的检验方法
。

1
、PCR基因扩增法在遗传性疾病产前诊断中的应用，遗传病是由于遗传物变化而引起的机体某一功能或缺陷或异常所致的疾病
，其根本变化在于遗传物质。其类型包括单基因遗传病，染色体遗传病及多基因遗传病 。遗传病诊断除询问病史 ，一般物理诊断
，普通实验室检查及了解症状、体征外有特殊性
。过去常应用系谱分析，染色体及性染色色质检验作为遗传病诊断的主要依据 ，再辅以相关的酶学分析从而作出诊断。随着分子生物不的迅速发展及其在遗传性病诊断中的广泛应用
，基因诊断技术诞生，基因诊断技术为遗传病的临床诊断起了很大的促进作用 。聚合酶链反应（PCR）技术是基因诊断主要技术之一
。这种快速 、灵敏的基因体外扩增技术与多种分子生物学手段相配合可以检出大部分已知的基因突变
、基因缺失、染色体错位等 ，PCR技术日益成为遗传病诊断的最有效 、最可靠的方法之一。以下举几个在国内有普遍意义的例子 。

（一）
、PCR检测地中海贫血；地中海贫血（Thalassemia）是一种遗传性慢性溶血性贫血病
，是世界上最常见且发病北最高的一种单基因遗传病
。在两广、贵州 、四川等地发病率较高，在广西等地高达15%。地中海贫血是由于基因突变造成珠蛋白的不平衡 ，使结构正常的肽链合成量减少甚至没有合成表现为溶血性贫血 。接受累基因种类分为α、β
、γ等
，其中以 α、β地贫为最常见，危害了最大。珠蛋白基因簇位于人6号染色短臂上 ，有两个重复基因基因位于α1 、α2
、两个α基因及其旁侧序列有很大的同源性，易出现染色体不等交换
，导致α基因缺失－α地贫
。α地贫基因部分缺失有α1基因部分缺失、α2基因缺失 、α1及α2基因同时缺失及非缺失型地贫。可以应用PCR技术扩增α1
、α2基因从而检测这些基因是否缺失、突变等，从而对α型地中海贫血作出诊断 。β地中海贫血基因缺陷主要表现为基因序列中单一核苷酸的突变 ，或少数碱基的缺失 、插入
，使正常β珠蛋白肽链合成减注或缺失
。应用位点特异性寡核苷探针（Aso）进行PCR产物斑点杂交即可对其作出诊断。

（二）
、苯丙酮尿症，苯西酮尿证（PKU）是一种常染色体隐性遗传病 ，患者因苯丙酸羟化酶转化为酷氨酸
，使苯氨酸及其代谢物在体内大量蓄积，出现脑组损伤及不可逆性智力发育障碍 。PKU患者出生时正常 ，新生儿一经确诊为PKU停止母乳喂养采用低苯丙氨酸钦食疗法8—10年
，可使患者智力水平发展维持正常
。由于低苯丙氨酸钦食非常昂贵，一般家庭难以承受 ，因此
，施行产前诊断，防止患儿出生是最好的选择。PAH只在肝细胞中表达 ，不能用血细胞，成纤维细胞、羊水 、绒毛细胞进行酶活性分析
，只能进行基因诊断 。PKU的基因变化并非全部PAH基因的缺失，而是以点突变为主要表现形式 ，而且其突变位点很多
。必须使用PCR扩增结合
，ASO，SSCP或使用扩增片段长度多态性分析（AmpFLA）进行检测 ，这些技术都较复杂
，检验人员须经专业培训。

（三）
、血友病，血友病是一组最为常见的遗传性凝血障碍 ，根据因子缺陷的不同分为甲、乙两型
，（Ⅷ 、Ⅸ因子缺陷），也有复合型血友病 ，但不常见 。甲型血友病发病率为1/10000
，Ⅷ因子基因位于G6PD基因附近，全长186Kb ，大范围的基因重排（缺失、插入
、重复）导致甲型血友病的病例很少，仅为Ⅷ因子缺陷的5%
，大部分病人表现为单个或少数碱基的突变
。由于Ⅷ因子基因长度为186Kb，突变位点多 ，而且新生突变频率高
，从临床角度讲不能对每一个突变都检测，可对最为常见的几种突变类型进行检测 ，主要的检测手段是PCR结合RELP分析。乙型血友病发病率占血友病的20%
，其基因变化及检测方法与甲型血友病类似 。

（四）、性别发育异常，区别雄性及雌性的物质基础是性染色体 ，哺乳动物胚胎发育中
，雌性表型不需要任何调节，而雄性表型则由多因素决定 ，位于Y染色体上的指导雄性性别分ss化的基因命名为睾丸决定因子（TDF）。现代研究表明
，SRY（Sex-determining region of Y chromosome）基因是TDF基因，位于Y染以体短臂末端
。SRY区缺失易导致46XY核型个体发育成女性。进行基因检测可以检出SRY基因组的易位及缺失 ，从而诊断性别发育异常，这一探索性别异常的研究非常热门 。另外还有一种46XY核型异常的病人即睾丸女性化
，这是用于雄激素受体（androgen receptor,AR）基因缺欠，使雄激素的靶基因对雄激素不应答就答或不全而引起的 ，根据病情的不同有不同的表型
，AR缺陷有很高的新生突变频率，表现为无家族史的散发病
。AR基因长90Kb ，位于X染色体上
，AR基因异常大部分为个别基因碱基的突变，可以通过PCR结合ASO或SSCP检出。

（五） 、脆—X综合征 ，脆—X综合片（fragile-X Syndrome,Frax）是发病率最高的一种X-连锁的智力低下综合征（X-linked mental retardation XLMR） 。因这种综合征与X染色体上的脆位点连锁而得名
。大多数FRAX男性智商（IQ）低于50
，并有随着年龄增长而下降的趋势。用人工酵母染色体（artificial yeast chromosome,YAC）克隆技术分离获得覆盖X-脆位点区域的YAC克隆，在这一克隆中获得一个能在人脑中表达的基因命名为FMR-1（fragile X mentai retardation-1）,FMR-1的5‘端有一个CGG（精）三核苷酸串（CGG）n,正常人群中（CGG）n中存在多态性 ，重复序列为6-46个
，当重复超过52个时，此区域的分裂呈不稳定 ，导致重复序列大幅度增加，无临床表现的携带者插入片段长度小于500bg
，有临床表现者，长度都大于600BP而且伴有甲基化 。人们将500bp作为前突变与全突变的分界线
。对Frax的诊断以前用细胞遗传学的方法检测脆位点 ，实验条件严格
，成功率不高。现在采用分子遗传学方法即可诊出前突变及全突变 。用PCR扩增CGG重复序列，检测扩增产物的长度
。突变基因的扩增片段增大 ，体细胞异质性时出现多条长度不等的扩增带甚至拖尾成一片
，或者因为扩充的全突变插入片段过长超出PCR扩增能力而结果无扩增现象。

2
、PCR基因扩增法在“Torsch
”诊断中的应用，在妊娠早期（1-3个月） ，有些病原微生物的感染易导致胎儿畸形
，这些病原体中最常见的有弓体（TOX）、风疹病毒（RV） 、单纯疱疹病毒（HSV）
、沙眼衣原体（CT）、及巨细胞（HCMV），对这几种病原体的检测根据其英文词首简称为Torsch试验 。

（一） 、弓形体的PCR检测 ，弓形体有广泛的自然疫原性
，人体多为隐性感染，抵抗力低时可以有临床表现。弓形体的诊断较困难 ，血清学方法敏感性较高但有交叉性出现假阳性而且无法确定近期感染
、远期感染或一过性感染
。确诊的方法是活组织检查或动物接各，这些方法阳性率太低不能推广。PCR检测可以检出样本中1-2个病原体而且准确性高
，是目前对弓形体检测最优秀的方法 。作为优生优育检查应于妊娠前或妊娠早期取全血样本，可以用EDTA或肝素抗凝 ，以EDTA抗凝效果最好
，检测外周血白细胞中是否有TOX存在
。对于不孕，多次自然流产或养小动物的产期妇女 ，作弓形虫检测有更重要的临床意义。

（二）、风疹病毒感染：风疹病毒（RV）是一种单股正极性RNA病毒
，人是风诊病毒的唯一宿主 。RV感染可以引起胎儿的畸形，影响胎儿免疫系统的发育 ，因此RV检测在优生优育工作中显得非常重要
。RV检测可以用直接培养法及IgM抗体测试法。培养法费时很长而且常受到其它病毒的干扰
，IgM测定法结果了不太准确，PCR法敏感性及特异性都很高而且简便快速 ，是RV感染最优秀的测试方法之一 。风疹病毒侵入体内后在上呼吸道增殖而出现症状
，面部出现丘疹，迅速遍及全身
。样本采用妊娠母亲的咽部拭子 、血清
、产妇的绒毛或妊娠如羊水等。RV病毒是RNA病毒 ，PCR扩增较复杂，应注意样本的采集时机
，操作的准确性 。

（三）、单纯疱诊病毒，单纯疱疹病毒（herpes simplex virus,HSV）是一种DNA病毒 ，可引起多器官的炎症
，可通过性接触传播
。HSVⅡ感染复发率高，80%的感染者于12个月内复发。HSV感染后经机体免疫系统清除 ，少数病人终生携带
，体弱时复发 。PCR法检测HSV敏感性高而且可以直接对HSVⅠ/Ⅱ型进行分型鉴定。

（四） 、沙眼衣原体，沙眼衣原体（CT）不仅能引起沙眼而且能引起生死器感染 ，是一种性传播性疾病
。与淋病（NG）
，梅毒等经典性传播性疾病不同，CT易经其它接触途径传播 ，少数地区对妊娠期妇女普查结果表明此人群中发病率高达20%-30%。在欧美等国家CT的感染已超过淋病而居性传播性疾病之首 。衣原体感染常呈无症性或非特异性症状的隐性感染
，不容易诊断
。以往用培养法进行确诊，费时且敏感性、准确性都不足。PCR用于CT检测时应注意不同检测目的的取材不同 ，对于性传播性疾病诊断应取生殖道分泌物（查脱落细胞），而对于早期妊娠病人应查其全血样本
，在妊娠后期或临产时再查阴道分泌物以便指导生育时产道清理 。

（五）
、人巨细胞（HCMV），HCMV感染十分普遍 ，除少数原发性感染发生原发性单核细胞增多症外
，极大多数为隐性感染
。HCMV可以长期潜伏在体内，当机体免疫功能低下时 ，病毒会激活而造成严重疾病在妊娠期如果孕妇感染HCMV可以引起早产、畸形 、死胎及新生儿巨细胞包涵体病等。HCMV属疱疹病毒科
，可以从唾液
、尿、宫颈分泌物及乳汁排出 。HCMV“金标准”的诊断试验是用单层成纤维细胞作病毒培养，其它的实验检查有血清学的检测及包涵体检测
。PCR是HCMV检测的一种新方法 ，用于检测的样本有血
，生殖道分泌物拭子等，用于优生优育检测时应取血样本。对于早期妊娠病人若有HCMV感染应再检测羊水 ，或其它妊娠物
，对病人认真及进跟踪检查，综合判断并采取相应的医疗措施 。

PCR应用于优生优育有很大的优越性 ，使这一技术的推广应用刚刚起步，应注意操作的准确性
，尽量避免误诊
。对感染性疾病首先应取孕妇血样检测，有可疑时或血中检出病原体核酸时应尽早作羊水等妊娠物检查。不管是否怀疑胎儿有严重遗传病倾和中或有感染引起的畸形风险 ，对胎儿的去留应尊重胎儿父母亲的意见 。

5 、实时荧光定量PCR技术在研究方面的部分应用

一
、 新药开发研究
，人用药物及其他药物

针对一些感染性疾病的药物，如各种病毒病、细菌病等 ，在新药的开发过程中
，快速了解药物对疾病进程的影响可以为新药开发节约大量的人力 、时间和资金，与以前所用的Elisa等方法相比 ，实时荧光定量PCR技术可以快速
、准确、定量 、灵敏地测定血液或组织中病原体的含量
，因此有利用分析药物的作用效果，为比较不同的配方的疗效
、用药量、用药时间等等提供快速 、定量的评价。

此方法除了用于人用药物以外 ，还可以用于畜用药物
，甚至其他经济动物及植物的药物研究等，因此其在药物研究方面的应用范围是很广的
。

二、 超早期感染用药物及疗法的研究与开发

实时荧光定量PCR方法测定是血液中病毒核酸的含量 ，因此不必等到病人体内产生抗体，同时
，由于其灵敏度与Elisa相比不可同日而语，在病毒感染的早期 ，即血液中病毒含量很低时就可以测定。因此就出现了一个新的领域
，即在病毒或细菌含量很低时如何用药，用什么药以及用药量等进行研究 ，为将疾病消灭在超早期作出贡献 。

三
、 药物疗效研究
，人用药物及其他药物

对于一些已经上市的新药或是应用了很长时间的老药，其用药的效果以及用药量及用药时间都可以进行进一步的研究 ，为更加合理化的应用这些药物为人类造福进行进一步的研究
。以前所用的方法由于不能准确定量
，灵敏度也不够，因此有很多需要研究的内容没有完成。这一方面需要研究内容很多 ，意义也很大 。

四、 新的愈后指标的研究

对于感染性疾病
，在药物作用至一定程度后，就认为可以停药了 ，但是应该在什么停药，现在大都没有一个明确的指标
，现在所用的指标由于受到检测方法的灵敏度及准确性限制，这一指标未必合理 ，因此有必要对治愈的指标以及指标与复发率以及疾病转化为其他疾病之间的关系等进行进一步的研究
，从而为药物或疗法彻底治愈疾病打下坚实的理论基础
。

五 、 新诊断及检验试剂的开发

现有的很多诊断及检验方法都不能同时满足快速
、灵敏、定量的要求如现有培养法 、Elisa法等等，而荧光定量PCR方法以则可以做到这一点 ，从而可为临床疾病
、商检、粮油检验 、食品检验
、血液检验等等开发新的试剂
，从而提高检验的灵敏度、速度及准确性等；这类试剂的种类是非常多的，所开发的试剂的社会效益及经济效益都是很巨大的。

六 、 血液检验漏检率

由于实时荧光定量PCR方法比Elisa灵敏很多 ，因此
，血站或血液研究所一般用来研究Elisa方法的漏检率，即分析Elisa方法测定为阴性的血样 ，再用实时荧光定量PCR方法来复检 。复检时
，一般24个Elisa阴性的血样混合成一个样本进行检测
。上海用此方法在用于血液制品的血液中发现一例HIV，后经测定供血者 ，证实病人的确是HIV阳性。北京市红十字血液中心正在测定北京血站中5万份Elisa阴性血样的漏检率 。由于不同地区所用的Elisa试剂
、方法、批号等都不相同，因此不同地区都有必要进行这一工作
。

由于荧光定量PCR方法的快速 、灵敏、定量的特点
，其在研究及开发方面的应用是不胜枚举的，如研究个人基因型与药物疗效之间的关系等；研究人员也可以根据自己研究项目开发其新的用途。

二
、TL988实时荧光定量PCR检测系统产品介绍

1、如何选择一款适合自己的PCR仪

回顾分子生物学的发展历程 ，PCR技术的发明和普及无疑是最重要的篇章之一 。而PCR技术在近20年的不断发展创新中
，最受瞩目当属荧光实时定量PCR技术(real-time quantitative PCR, or qPCR)。定量PCR技术真正实现了PCR从定性到定量的飞跃，通过对PCR过程的实时监控 ，专一 、灵敏快速
、可重复地精确定量起始模版浓度
，已经在科研和临床诊断领域得到了越来越广泛的应用
。我公司从荧光定量PCR的原理入手，详细介绍荧光定量PCR仪的类型和技术 ，为定量PCR仪的选择提供详细参考。

定量PCR仪主要由两部分组成
，一个是PCR系统，一个是荧光检测系统 。从前面的原理介绍不难看出选择定量PCR仪的关键--由于定量PCR必需借助样本和标准品之间的对比来实现定量的 ，对于定量PCR系统来说
，重要的参数除了传统PCR的温控精确性、升降温速度等等，更重要的还在于样品孔之间的均一性 ，以避免微小的差别被指数级放大
。至于荧光检测系统，多色多通道检测是当今的主流趋势--仪器的激发通道越多
，仪器适用的荧光素种类越多，仪器适用范围就越宽；多通道指可同时检测一个样品中的多种荧光 ，仪器就可以同时检测单管内多模版或者内标+样品
，通道越多，仪器适用范围越宽 、性能就更强大。荧光检测系统主要包括激发光源和检测器 。激发光源有卤钨灯光源
、氩离子激光器、发光二极管LED光源 ，前者可配多色滤光镜实现不同激发波长
，而单色发光二极管LED价格低 、能耗少
、寿命长，不过因为是单色 ，需要不同的LED才能更好地实现不同激发波长
。监测系统有超低温CCD成像系统和PMT光电倍增管
，前者可以一次对多点成像，后者灵敏度高但一次只能扫描一个样品 ，需要通过逐个扫描实现多样品检测
，对于大量样品来说需要较长的时间。定量PCR仪需要考虑的另外一个因素是软件设计，这一点目前较新型号的仪器都有不错的配套软件可以满足常规使用 。--随着定量PCR技术在临床诊断、疾病

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